Quebra-cabeça Neurônios 3 de Hippocampal

A distribuição dos neurônios hippocampal que expressam EGFP do promotor Nr4a1/Nur77 (Tg (Nr4a1-EGFP) GY139Gsat, www.gensat.org) em CA1 hippocampal colabelled para o transportador vesicular do glutamato (VGluT1, vermelho, Invitrogen polyclonal, 1:1000) e manchou com o DAPI (azul) para mostrar camadas da pilha. A expressão de EGFP foi amplificada com a galinha anti-GFP (Abcam, 1:2000). VGluT1 etiqueta os terminais excitatory que synapsing na camada molecular do giro dentate, os terminais mossy da fibra em CA3 e os campos dendrítico das pilhas piramidais no estrato orien e no radiatum do estrato. Nr4a1-EGFP é expressado pesadamente pelas pilhas CA1 piramidais e a um grau inferior nas pilhas CA3 piramidais com pilhas escassas no giro dentate (veja imagens associadas). A seção (40 um, sagital) foi montada com Fluoromount G e imaged com um 5X, 0,15 objetivos do NA em um microscópio de Zeiss Axiovert. AF568 era excited em 562/40 de nanômetro e de emissão recolhidos em 624/40 de nanômetro com filtros de Semrock e em uma única banda dichroic (530-585 nanômetro refletido, 601-800 nanômetro transmitido). AF488 era excited em 482/35 de nanômetro e de emissão recolhidos em 536/40 de nanômetro com filtros de Semrock e em uma única banda dichroic (446-499 nanômetro refletido, 513-735 nanômetro transmitido). DAPI era excited em 350/50 de nanômetro e de emissão recolhidos em 460/50 de nanômetro com um CLP400 dichroic (croma). As únicas imagens foram capturadas para cada canal usando um SR. CCD de Zeiss Axiocam e pseudo-coloridas usando Axiovision. A subtração linear do fundo foi usada na imagem apresentada. Veja a identificação 21305052 de Davis e de Puhl (2011), de Pubmed, para um protocolo de mancha detalhado e imagens da expressão de EGFP no striatum e no amygdala nesta tensão. Esta imagem é parte de uma série que caracteriza a expressão de EGFP do promotor Nr4a1 durante todo o cérebro.